質(zhì)粒是細胞、基因和疫苗治療的重要工具。無論裸質(zhì)粒還是包裝病毒載體，最終都是將質(zhì)粒攜帶的目的基因導入息細胞，達到治療或預防疾病的目的。作為關鍵起始材料，高質(zhì)量、高純度的超螺旋質(zhì)粒是確保裸質(zhì)粒、AAV和LV等基因載體安全有效的前提條件。

質(zhì)粒的生產(chǎn)工藝步驟

? 質(zhì)粒DNA骨架的構建

? 質(zhì)粒DNA轉化至感受態(tài)細胞，篩選克隆及建立研究用菌種庫（RCB）

? 建立用于生產(chǎn)的主細胞庫及工作細胞庫

? 菌種復蘇及上游發(fā)酵生產(chǎn)（獲得足夠量的質(zhì)粒DNA發(fā)酵液）

? 下游純化（去除產(chǎn)品及工藝相關雜質(zhì)）

? 分裝獲得超螺旋質(zhì)粒DNA（可用于病毒載體包裝，質(zhì)粒DNA疫苗，細胞治療產(chǎn)品的轉導基因修飾系統(tǒng)等）

? 限制性內(nèi)切酶酶切獲得線性化質(zhì)粒（作為mRNA轉錄模板的原材料時需要該步驟）

耀海生物質(zhì)粒DNA工藝開發(fā)服務團隊秉持質(zhì)量源于設計（QbD）的理念，根據(jù)菌種特性與質(zhì)粒超螺旋比例等關鍵質(zhì)量標準建立穩(wěn)健可放大的小試工藝。耀海質(zhì)粒DNA工藝開發(fā)平臺涵蓋質(zhì)粒構建、菌種構建與優(yōu)勢菌篩選等構建與篩選服務。我們在工藝開發(fā)平臺下為客戶項目提供定制化小試級別發(fā)酵與純化工藝開發(fā)、制劑工藝開發(fā)服務，并同時為客戶項目提供分析方法開發(fā)與預驗證等原液/制劑全流程開發(fā)服務。耀海質(zhì)粒DNA工藝開發(fā)平臺可滿足質(zhì)粒DNA（原液與制劑）的工藝開發(fā)、工藝優(yōu)化、工藝表征、工藝驗證和方法學開發(fā)需求。

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質(zhì)粒發(fā)酵工藝平臺

耀海生物通過優(yōu)化基礎培養(yǎng)基、補料培養(yǎng)基和發(fā)酵控制策略，建立了適用于質(zhì)粒生產(chǎn)的大腸桿菌高密度發(fā)酵平臺工藝，培養(yǎng)周期30h內(nèi)，質(zhì)粒產(chǎn)量超過1g/L。

此外，耀海生物能夠針對不同的質(zhì)粒和宿主菌，基于單因素或DoE方法提供工藝優(yōu)化解決方案，定制化滿足質(zhì)粒高產(chǎn)量、高質(zhì)量需求。

耀海生物1 g/L質(zhì)粒發(fā)酵工藝

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發(fā)酵工藝平臺介紹

耀海生物基于實驗設計（DoE）等方法學，能夠快速實現(xiàn)不同分子的定制化工藝開發(fā)和優(yōu)化。我們專注于微生物重組蛋白、質(zhì)粒DNA的工藝開發(fā)，針對大腸桿菌、酵母建立了高產(chǎn)量的平臺工藝，歡迎垂詢：19952981076

大腸桿菌包涵體產(chǎn)量：最高可達10g/L以上

大腸桿菌可溶性蛋白產(chǎn)量：最高可達5g/L以上

酵母胞外分泌蛋白含量：最高可達30g/L以上

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純化工藝平臺介紹

發(fā)酵收獲的菌體中除質(zhì)粒DNA外，還包含大量的宿主蛋白(HCP)、宿主DNA(HCD)、宿主RNA、內(nèi)毒素等工藝過程殘留。因此需針對質(zhì)粒DNA的理化特性，設計與開發(fā)穩(wěn)健可放大的純化工藝，獲得符合超螺旋質(zhì)粒純度、雜質(zhì)殘留要求的質(zhì)粒DNA原液。適用于質(zhì)粒DNA大規(guī)模生產(chǎn)的純化方案如下：離心或過濾收菌、堿裂解中和、澄清過濾、超濾換液、凝膠過濾去除RNA、嗜硫親和層析捕獲超螺旋質(zhì)粒、陰離子柱去除內(nèi)毒素等。

作為微生物表達體系CRDMO行業(yè)領跑者，耀海生物工藝開發(fā)團隊秉持質(zhì)量源于設計(QbD)的理念。我們科學地考量質(zhì)粒DNA的生理生化特性和關鍵質(zhì)量屬性(CQA)，利用OFAT單因素或DoE快速優(yōu)化過濾/裂解/超濾/層析等純化工藝參數(shù)。耀海生物已針對不同序列、不同長度的超螺旋質(zhì)粒開發(fā)出滿足產(chǎn)品性能、可穩(wěn)定放大的純化工藝。

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質(zhì)粒工藝平臺服務優(yōu)勢

?成熟的優(yōu)勢菌篩選平臺

耀海平臺提供高通量、多宿主類型的大腸桿菌優(yōu)勢菌篩選服務，單批可篩選100+候選菌株。

?高通量快速開發(fā)平臺

耀海平臺基于DoE和平行性實驗系統(tǒng)，高通量篩選發(fā)酵、純化、制劑工藝或處方。我們可滿足不同長度質(zhì)粒DNA的表達量、純度、雜質(zhì)殘留等開發(fā)目標，同時高度契合生產(chǎn)放大需求。

?分析方法開發(fā)平臺

根據(jù)不同特性的質(zhì)粒DNA，我們針對性開發(fā)最適合的質(zhì)量分析方法；同時配合工藝路線完成關鍵項質(zhì)量檢測，涵蓋生化、理化等。

?合規(guī)性保障平臺

我們?nèi)嬖u估工藝過程與質(zhì)量標準的合規(guī)性，如宿主來源、無動物源、抗生素類型、毒性或致敏性、純度、工藝過程殘留等，全流程符合法規(guī)申報需求。

?豐富的質(zhì)粒開發(fā)經(jīng)驗

耀海團隊具備多質(zhì)粒項目開發(fā)經(jīng)驗，針對線性化/超螺旋質(zhì)粒開發(fā)穩(wěn)健可放大的小試工藝。以期助力裸質(zhì)粒、AAV、mRNA等細胞與基因治療產(chǎn)品的產(chǎn)業(yè)化進程。

?CDMO一站式服務平臺支撐

基于超十年的多品種生產(chǎn)及服務經(jīng)驗，耀海生產(chǎn)團隊全流程提供生產(chǎn)經(jīng)驗技術支持。工藝開發(fā)團隊貫徹產(chǎn)業(yè)化理念，能夠保證小試工藝高度契合生產(chǎn)需求。

? 技術轉移支持服務

工藝開發(fā)人員全流程支持小試工藝的轉移和放大。